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的液相色譜的五大系統(tǒng)介紹來了
點(diǎn)擊次數(shù)：4378 發(fā)布時(shí)間：2018-12-10
液相色譜的五大系統(tǒng)：
1、進(jìn)樣系統(tǒng)
進(jìn)樣系統(tǒng)分為手動(dòng)進(jìn)樣閥和自動(dòng)進(jìn)樣器。
手動(dòng)進(jìn)樣閥
對于手動(dòng)進(jìn)樣閥，使用過程中需要注意每個(gè)樣品進(jìn)樣完成后應(yīng)對進(jìn)樣閥進(jìn)行清洗，防止殘留對下一個(gè)樣品分析的影響。
還需要注意進(jìn)樣方式，以20μL定量環(huán)為例，我們可以選擇*充滿定量管或部分充滿定量管。為了進(jìn)樣的重復(fù)性，選擇*充滿定量管進(jìn)樣方式時(shí)，需要注入定量環(huán)體積3倍以上的樣品;選擇部分充滿定量管進(jìn)樣方式時(shí)，進(jìn)樣體積應(yīng)在定量管體積一半以下，即1-10μL。
自動(dòng)進(jìn)樣器
如果采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，首需要注射器里面沒有氣泡存在，否則影響進(jìn)樣量性;其次是樣品瓶里面有足夠的樣品，進(jìn)樣針能夠吸到樣品。
為了避免交叉污染需要定期對樣品瓶、蓋和墊進(jìn)行清洗。若自動(dòng)進(jìn)樣器長時(shí)間不使用，應(yīng)該注意：腐蝕性的流動(dòng)相或洗液(例如，堿性或酸性緩沖溶液)必須*從系統(tǒng)中置換出來。同時(shí)，為了避免細(xì)菌的生長，應(yīng)將一個(gè)樣品瓶中充滿甲醇，并重復(fù)幾次進(jìn)樣操作。
2、系統(tǒng)
泵按輸出液恒定的因素分恒壓泵和恒流泵。對液相色譜分析來說，泵的流量穩(wěn)定性更為重要，這是因?yàn)榱魉俚淖兓瘯?huì)引起溶質(zhì)的保留值的變化，而保留值是色譜定性的主要依據(jù)之一。因此，恒流泵的應(yīng)用更。
泵按工作方式分為氣動(dòng)泵和機(jī)械泵兩大類。機(jī)械泵中又有螺旋傳動(dòng)注射泵、單活塞往復(fù)泵、雙活塞往復(fù)泵和往復(fù)式隔膜泵。
HPLC使用的壓泵應(yīng)滿足下列條件：
a 流量恒定，無脈動(dòng)，并有較大的調(diào)節(jié)范圍（一般為1～10ml/min）；
b 能抗溶劑腐蝕；
c 有較的壓力；對一般分離，60×105Pa的壓力就滿足了，對分離，要求達(dá)到150～300×105Pa。
（1）往復(fù)式柱塞泵結(jié)構(gòu)和原理
當(dāng)柱塞推入缸體時(shí)，泵頭出口（上部）的單向閥打開，同時(shí)，流動(dòng)相進(jìn)入的單向閥（下部）關(guān)閉，這時(shí)就輸出少量的流體。
反之，當(dāng)柱塞向外拉時(shí)，流動(dòng)相入口的單向閥打開，出口的單向閥同時(shí)關(guān)閉，一定量的流動(dòng)相就由其儲(chǔ)液器吸入缸體中。
這種泵的特點(diǎn)是不受整個(gè)色譜體系中其余部分阻力稍有變化的影響，連續(xù)供給恒定體積的流動(dòng)相。
（2）氣動(dòng)放大泵結(jié)構(gòu)和原理
其工作原理是：壓力為p1的低壓氣體推動(dòng)大面積（SA ）活塞A，則在小面積（SB ）活塞B輸出壓力增大至p2的液體。壓力增大的倍數(shù)取決于A和B兩活塞的面積比，如果A與B的面積之比為50：1 ，則壓力為5×105Pa的氣體就可得到壓力為250×105Pa的輸出液體。這是一種恒壓泵。
泵頭通常由兩部分組成--單向閥和密封圈-柱塞桿。單向閥一般由閥體\塑料\或陶瓷閥座和紅寶石球組成。在壓力的作用下寶石球離開閥座，流動(dòng)相流過單向閥；反之，在反向力的作用下，寶石球回到閥座上，此時(shí)流動(dòng)相不再流過單向閥。
顯然寶石球與閥座之間的配合必須非常適合才能防止流動(dòng)相的泄漏。為了單向閥不發(fā)生泄漏，一些單向閥中安裝了兩套寶石球和閥座，也有一些單向閥是將寶石球用一個(gè)合適的彈簧壓在閥座上。
在不同的應(yīng)用領(lǐng)域，單向閥閥體的材料有所不同，例如考慮生物兼容性的系統(tǒng),單向閥的閥體往往采用金屬鈦，而不用不銹鋼。為了降低成本和減少維護(hù)費(fèi)用，一些生產(chǎn)廠商還采用了可置換式的卡套式塑料單元件，當(dāng)然其功能仍保持不變。
系統(tǒng)即是指壓恒流泵，其作用是能提供穩(wěn)定的流速。
溶劑過濾頭：吸液過濾頭，或稱沉子，主要作用是過濾流動(dòng)相中可能存在的顆粒性雜質(zhì)。長時(shí)間使用后，雜質(zhì)有可能阻塞溶劑過濾頭上的過濾板孔隙；或長時(shí)間使用緩沖液，過濾頭表面容易產(chǎn)生一層膜，阻礙流動(dòng)相正常通過。
嚴(yán)重時(shí)，即使是已聲過的溶劑，泵吸液時(shí)也會(huì)有氣泡在四氟管里產(chǎn)生，因此應(yīng)經(jīng)常對過濾頭進(jìn)行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇或者30%稀硝酸溶液，正相系統(tǒng)需注意濾頭的烘干處理。
單向閥：單向閥的作用是確保液體向一個(gè)方向流動(dòng)，是壓恒流泵穩(wěn)定的。日常使用過程中，可以通過觀察壓力的情況，初步判斷流量是否正常。
如果系統(tǒng)已經(jīng)平衡一段時(shí)間，壓力應(yīng)該是穩(wěn)定的。但如果壓力存在波動(dòng)，則表明流量不穩(wěn)定；如果無壓力，則表明無流量。這兩種情況大多是因?yàn)閱蜗蜷y里混入了氣泡或雜質(zhì)。
混入氣泡的情況，應(yīng)把放空閥打開，按沖洗鍵將里面的氣泡排出。單向閥混入雜質(zhì)的情況，須對其進(jìn)行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇，安裝時(shí)注意標(biāo)記環(huán)的方向。
密封圈：密封圈是固定在柱塞桿上防止泵腔內(nèi)的液體泄漏，是泵頭正常的關(guān)鍵部件。但柱塞桿和柱塞密封圈長期使用會(huì)發(fā)生磨損，主要與流量、操作壓力和所使用的流動(dòng)相有關(guān)。
當(dāng)使用含鹽的流動(dòng)相時(shí)，由于脫水或蒸發(fā)，可能形成鹽結(jié)晶，而泵運(yùn)動(dòng)時(shí)鹽結(jié)晶會(huì)導(dǎo)致密封圈和柱塞桿的磨損。因此，每天實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)后都需用純水沖洗一次密封圈(在柱塞密封圈和二級(jí)密封圈之間)，保持清洗管內(nèi)有水以防止形成晶體，延長柱塞桿和密封圈的使用壽命。
在線過濾器：為了防止由于流動(dòng)相雜質(zhì)微粒進(jìn)入色譜系統(tǒng)，泵在放空閥內(nèi)安裝了在線過濾器，經(jīng)泵出口流出的液體通過在線過濾器，經(jīng)排空管流出的液體不通過在線過濾器。
儀器使用一定時(shí)間后，建議用戶清洗在線過濾器的燒結(jié)不銹鋼過濾片。用扳手卸下壓帽，將密封環(huán)和燒結(jié)不銹鋼過濾片一同取出清洗，清洗后按原位裝上。清洗溶劑可以選擇30%稀硝酸溶液，正相系統(tǒng)需注意濾頭的烘干處理。
3、分離系統(tǒng)
分離系統(tǒng)包括色譜柱、保護(hù)柱以及柱溫箱。
色譜柱：色譜柱是樣品分離的核心。色譜柱在使用前必須仔細(xì)閱讀說明書，了解色譜柱使用的pH值范圍、溶劑耐受范圍、壓力范圍和維護(hù)方法等事項(xiàng)。色譜柱使用完后，需及時(shí)對色譜柱進(jìn)行沖洗。沖洗完成后，應(yīng)該將色譜柱從儀器上拆下來，兩端用廠家配的堵頭密封后，保存在色譜柱盒里。
保護(hù)柱：保護(hù)柱的作用主要是防止吸附性的雜質(zhì)對色譜柱污染，從而延長色譜柱的壽命。針對不同型號(hào)的色譜柱，應(yīng)選擇相對應(yīng)填料的保護(hù)柱。應(yīng)注意柱芯也是有壽命的，應(yīng)該定期進(jìn)行更換。
柱溫箱：色譜柱溫度變化，可能會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間的變化。為了避免這個(gè)問題，建議使用柱溫箱。
4、檢測系統(tǒng)
液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。
（1）紫外檢測器
該檢測器適用于對紫外光（或可見光）有吸收性能樣品的檢測。其特點(diǎn)是，使用面廣（如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）、靈敏度（檢測下限為10-10g/ml）、線性范圍寬、對溫度和流速變化不敏感、可檢測梯度溶液洗脫的樣品。
（2）示差折光檢測器
凡具有與流動(dòng)相折光率不同的樣品組分，均可使用示差折光檢測器檢測。目前，糖類化合物的檢測大多使用此檢測系統(tǒng)。這一系統(tǒng)通用性、操作簡單，但靈敏度低（檢測下限為10-7g/ml），流動(dòng)相的變化會(huì)引起折光率的變化，因此，它既不適用于痕量分析，也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。
（3）熒光檢測器
凡具有熒光的物質(zhì)，在一定條件下，其發(fā)射光的熒光度與物質(zhì)的濃度成正比。因此，這一檢測器只適用于具有熒光的有機(jī)化合物（如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質(zhì)等）的測定，其靈敏度（檢測下限為10-12～10-14g/ml），痕量分析和梯度洗脫樣品的檢測均可采用。
HPLC常用的檢測器是紫外檢測器。在日常使用過程中紫外檢測器主要需要注意檢測池和氘燈的使用與維護(hù)。
檢測池：檢測池長時(shí)間使用可能會(huì)造成污染，如果儀器的參比能量(REF ENERGY)正常，測量能量(SMPENERGY)偏低，可能為檢測池污染導(dǎo)致，可以對檢測池進(jìn)行清洗。
對檢測池零件的進(jìn)行清洗，一般采用約1：4的硝酸溶液聲清洗，分別用純水和甲醇溶液清洗，然后重組裝并將檢測池池體推進(jìn)池腔內(nèi)，擰緊池板螺絲。注意組裝中，池玻璃及墊片一定要放正，以免壓碎池玻璃，造成檢測池泄漏。
氘燈：氘燈正常使用壽命可在1500小時(shí)以上。燈的使用壽命與檢測器的使用時(shí)間和開啟頻率有關(guān)，因此使用過程中應(yīng)盡量節(jié)省不必要的開機(jī)時(shí)間，減少開關(guān)頻率，以延長氘燈的使用壽命。
如果地判斷出氘燈已經(jīng)不能點(diǎn)亮或能量太低，則需要更換的氘燈。在購買氘燈時(shí)，應(yīng)注意咨詢和核對氘燈的型號(hào)與儀器型號(hào)是否匹配。更換到氘燈時(shí)，參照儀器說明書中的相關(guān)內(nèi)容，要注意氘燈連接線的位置順序。
5、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
該系統(tǒng)可對測試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。
